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關于黃體生成激素elisa kitHIV測定過程

點擊次數:1037 發布時間:2020-04-22

黃體生成激素elisa kitHIV測定過程:

1 配液:ELISA試劑盒將50ml濃縮洗刷液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。

2 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板設陰性對照3孔、陽性對照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白對照1孔。

3 加樣:分別在相應孔加入待檢標本、陰性、陽性對照100μl,用封板膜封板后置37℃溫育30min。

4 洗刷:當心把封板膜揭去,用洗板機挑選5次程序,洗板后拍干。 

5 加酶:每孔加酶結合物100μl(空白對照孔除外),充沛混勻,用封板膜封板后置37℃溫育30min。

6 洗刷:當心把封板膜揭去,用洗板機挑選5次程序,洗板后拍干。

7 顯色:每孔加入顯色劑A液和B液各50μl,悄悄振動混勻,封板后置37℃避光顯色15min。

8 測定:每孔加終止液50μl,悄悄振動混勻。設定酶標儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標儀比色,參閱波長630 nm),空白調零,讀取各孔OD值。

9 判斷成果:核算臨界值(cut-off)(CO)值。 臨界值=陰性對照A均值+0.12 正常情況下,陰性對照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對照的OD值>0.1應放棄,若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.1,應重復實驗。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。

正常情況下,陽性對照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對照的OD值<0.8應放棄,若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應重復實驗。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。 

ELISA試劑盒注意:關于篩查陽性標本,應從頭取樣雙孔復試,復試陽性者應按照《全國HIV檢測管理規范》送HIV確證實驗室進行確證實驗。 質量操控: 每塊板設陰陽性及空白對照,并于每次實驗用克己質控血清作質控,將質控血清孔OD值采用“即刻法"核算或標在質控圖上,如質控有效,標明實驗牢靠;如失控,則要查看試劑效期、貯藏溫度、試 驗溫度是否正常、操作過程是否正確,直至從頭實驗使其在控。 

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